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异柠檬酸裂解酶检测试剂盒说明书

作者:habao 来源:未知 日期:2018-6-1 14:50:41 人气: 标签:油料作物种子萌发时
导读:ELISA检测试剂盒(人,大鼠,小鼠,兔子,牛马羊,植物,鱼,昆虫),科研生化试剂,标准品,原代细胞,学试剂盒,生化法检测试剂盒,进口抗体ICL(EC4.1.3.1)主…

  ELISA检测试剂盒(人,大鼠,小鼠,兔子,牛马羊,植物,鱼,昆虫),科研生化试剂,标准品,原代细胞,学试剂盒,生化法检测试剂盒,进口抗体

  ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。

  异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)试剂盒说明书测定原理:ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用成乙醇和NAD,NADH 在 340nm 下有特征吸收峰,监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。

  试剂三:粉剂×3 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂仍-20℃保存;

  试剂五:液体 800L×2 支,4℃保存;临用前每支加入 560L 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂仍 4℃保存;

  1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例( 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

  2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

  将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中,加试剂六的同时开始计时,在 340nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 A=A1-A2。

  注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四、五和样本按比例配成混合液,在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min 以上,测定时加入 1220L 混合液和 300L 试剂六测定。

  异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)试剂盒说明书ICL 活性计算:(1)按样本蛋白浓度计算:

  单位的定义:每 mg 组织蛋白中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

  单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

  比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

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