食用菌制种工艺流程工艺

　　食用菌制种工艺流程工艺_农学_农林牧渔_专业资料。食用菌制种工艺流程尤昌建 ? 随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需要量随之增 加，而现有菌种生产单位明显偏少，许多菇农不 得不向外引种。长途购运菌种不仅花费大，成本 高而且菌种因破瓶而易引起杂菌

　　食用菌制种工艺流程尤昌建 ? 随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需要量随之增 加，而现有菌种生产单位明显偏少，许多菇农不 得不向外引种。长途购运菌种不仅花费大，成本 高而且菌种因破瓶而易引起杂菌污染，从而严重 影响栽培食用菌的经济效益。菇农若能掌握菌种 生产程序和制种技术，自行制种，逐步发展成制 种专业户，也是一项很好的致富门。 菌种生产 程序，通常分为母种、原种和栽培种，也就是通 常所说的一级、二级、菌种。其中母种的分 离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的 制作则比较简单。 一、母种的分离选育? 母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交 育种和原生质融合等手段获得。作为一般 制种专业户，可以采用人工选择方式分离 培育母种。 1、采集种源? 从野生或人工栽培群体中，选择有代表性 的优良菇体作为种源。种菇的标准是：八 成熟，朵形圆正、肉质肥厚，无病虫害。 采集1--2朵符合上述标准的种菇编上号码， 作为分离母种的材料。从栽培室采集的应 标有原菌株代号。 2、培养基配制琼脂培养基（ PDA 培养基）? 马铃薯200--250克，琼脂15--20克，葡萄糖20--25克，清 水1000毫升。也可以加硫酸镁1--1．5克，维生素B1微量， 磷酸二氢钾2--3克。先将马铃薯洗净去皮，挖去芽眼，切 成薄片，置于铝锅内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱布 过滤，取汁。然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让琼 脂充分溶化；再将葡萄糖等加入，稍煮几分钟后，同样用 4层纱布过滤，取其汁液。将汁液趁热装入玻璃试管内。 装至管长的1／5，管口用棉花塞紧，或将汁液装入玻璃三 角瓶内，装量20毫升。然后置于高压锅内，在98--108千 帕／厘米的压力下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出，趁 热将试管斜排于桌面上，冷却后即成为固体斜面培养基。 3、母种分离方法? (1)孢子弹射法。将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼 脂培养基的三角瓶内，让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝。 也可以剪取一小块菇体，贴附在试管斜面培养基表面，让孢子散落在 培养基上萌发菌丝，即能获得母种。 ? (2)组织分离法。将消毒过的种菇，在接种箱内用手从菇柄处对半掰开， 或用刀片切开，使菇体形成对开。在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，用 接种刀切取一小块菇体，然后纵切成5毫米x10毫米的小薄片，用接种 针挑取一小块，接入斜面培养基的中央，待其萌发菌丝，即可得到母 种； ? (3)基内分离法。选择已长菇的木段，削去树皮及表层木质部，用75 ％的酒精消毒后，锯成1厘米厚的薄片，放入0．1％的升汞水中消毒 1--2分钟，再用灭菌水洗去残液。然后再将小薄片劈成0．5--1厘米宽 的小条，接入斜面培养基中央，待长出菌丝后即得母种。也可以在已 长菇的菌袋中，经消毒处理后，用接种针钩取袋内色泽纯、长势旺的 菌丝体，接种在试管斜面培养基中央，待萌发菌丝后，同样获得菌种。 4、适温培养? 通过上述不同方式将菌种分离接种于试管 后，要及时将试管移入已消毒的培养箱或 培养室内培养，温度控制在25℃左右，使 分离获得的孢子或菌丝在适温下发育。一 般孢子弹射3--4天后孢子萌发成菌落，10天 后菌丝长满管；组织分离接种后2--3天，菌 丝即萌发，并在培养基上蔓延生长；菇木 分离接种后，7天菌丝即恢复生长。 5、选育提纯? 通过上述方法得到的菌丝，不一定都是优 质的，还需要选育提纯。因此，在菌丝萌 发后，要认真观察，挑选色泽纯、健壮、 长势正常、无间断的菌丝，在接种箱内连 同培养基钩取菌丝，接入另备的试管培养 基上。在23--25℃的恒温条件下，培养7-10天，待菌丝长满管后，再进行观察，从 中择优取用，即为“母代”母种。 6、转管扩接? 母代母种可以转管扩接成“子代”母种。 采用同样的斜面培养基，每支可扩接30--50 支子代母种。生产上供应的多为子代母种。 它可以再次转管扩接。一般每支可扩接成 20--25支子代母种，但转管次数不得超过5 次。 7、出菇试验? 分离选育的母种，还必须进行出菇试验。 方法是：把母种接种于瓶或袋装的木屑培 养基上，根据各种菇耳种性对温度的要求， 进行适温培养，直至出菇才可用于生 产。 二、原种繁殖培养? 将母种接在瓶或袋的木屑培养基上，通过 培养，即成原种。 1、原种木屑培养基配方? 杂木屑77．5％，麦麸20％，蔗糖1％，石 膏粉1．2％，硫酸镁0．3％。pH值(灭菌 前)6．5--7，含水量调至60％。将上述原、 辅料混合拌匀，装入750毫升的玻璃菌种瓶 内，装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花， 再用牛皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高 压灭菌锅内，在147千帕／平方厘米压力下 灭菌2--2．5小时。也可进行常压灭菌，在 100℃下保持10--11小时，达标后趁热取出， 让其冷却。 2、接入菌种? 待料温降至25℃以下时，在无菌条件下， 将试管种分割成若干决，通过酒精灯火焰 迅速接入原种培养基上，每支母种可按4--6 瓶原种。 3、发菌培养? 接种后及时将玻璃菌种瓶移入25℃菌种培 养室内进行培养。空间相对湿度控制在 70℃以上，避免强光照射。原种培养时间 一般菇类需要40--50天，草菇、银耳只需 15--20天即可。 4、去杂选优? 原种培育过程中，要每天进行观察，如发 现有杂菌污染的，应立即淘汰 三、栽培种扩大培育? 将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培 养30--35 天即为栽培种 ( 又叫生产种) ，可用于生产栽培。 栽培种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通 常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米x24厘米、15 厘米 x28 厘米、 17 厘米 x33 厘米等，可根据各种菇耳特性 和当地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌， 要求灭菌温度达100℃，保持8--10小时，达标后趁热卸袋 冷却。待料温降至25℃以下时，在无菌条件下接入选定品 种的原种。每瓶原种可扩接成50--60瓶栽培种。菌种培育 室要求洁净，防强光，室温掌握在23--25℃，并经常检查， 发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋， 尖端菌丝反转上爬1--3厘米时，为适龄的栽培种 ? ? 在自然界里，食用菌都不是单独存在的， 而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在 一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食 用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养， 获得纯的优良菌种。 (一）母种的分离培养? 食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、 组织分离法以及基内菌丝分离等。 1.孢子分离法? 孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无 性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。 这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有 差异，且自然分化现象较严重，变异大， 需经出菇试验才能在生产上应用。 （1）单孢分离法? 是每次或每支试管只取一个担孢子， 让它 萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇 和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能 力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分 离生产上较少采用，而且技术复杂，一般 采用多孢分离法。 （2）多孢分离法? 就是把许多孢子接种在同一培养基上，让 它们萌发、交配来获得食用菌纯菌种 的一种方法。 ①种菇孢子弹射法? 选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳 产，适应性强的分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用 无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干 表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁 丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿；上端小 孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静 置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成 一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色， 香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试 管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成 菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。 ? 还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述 程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器 的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱 布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移 入 20℃左右恒温箱培养。 ②褶上涂抹法? 按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇， 用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶 片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养 基上划线接种。 ③钩悬法? 取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑 木耳、毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢 丝（或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂 于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到 培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、 转接即可。 ④贴附法? 按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块， 用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等 贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。 经6～12小时的培养，待孢子落在斜面上， 立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新 的试管中培养即可。 ? 孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复 壮，当母种定植一星期左右，菌丝布满斜 面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、 无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大， 一般到栽培种，转管不宜超过5次。 孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验， 鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、 冬菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母 种。 例：银耳孢子分离?? 在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。 按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经12 羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长 小时培养后，瓶底培养基表面就有“孢子印”。 取出种耳，置 20℃—25℃温箱培养2～3天，培养 迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶，取先 基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银 端菌丝，转管移接，置 25℃—28℃上培养， 耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此时 移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移 重复转管几次即可得到优良纯种 接入营养丰富，且表面比较干燥的培养基上。经 30天左右，菌落长出白色菌丝。 ? 银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子 银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝 也不易萌发。在进行两菌混合时，先取经 的子囊菌（香灰菌丝）混合培养时，由后者帮助 8 ～IO天培养的银耳菌丝斜面，按无菌操作 分解木材及其他一些纤维物质，提供营养，才能 利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成。 方法在该斜面上距银耳菌丝约 0.5厘米处接 入一 小块羽毛状菌丝。置25℃下培养1周即 得到混合好的银耳母种。 2．组织分离培养法? 利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获 得母种的简便方法，即组织分离。该法操 作简便，菌丝生长发育快，品种特性易保 存下来，特别是杂交育种后，优良菌株用 组织分离法能使遗传特性稳定下来。 （1）子实体分离? 种菇要选朵大盖厚，柄短，分成熟的 优良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以 0.1％的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗 并揩干或用75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2 次，进行表面消毒。接种时，只要将种菇 撕开，在萌盖和菌柄交界处或菌褶处，挑 取一小块组织；移接 到PDA培养基上。置 25℃左右温度下培养3-5天，就可以看到组 织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得 到菌种。如香菇、平菇等可以用此方法。 （2）菌核分离? 茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集。 而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分 离，同样可以获得菌种。方法是将菌核表 面洗净，用酒精或升汞消毒后，切开菌核， 取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在 PDA 培养基斜面上，保温培养。应注意的 是，菌核是贮藏器官，大部分是多糖类物 质，只含有少量的菌丝，因此挑取的组织 块要大一些，如果组织块过小，则不易分 出菌种。 （3）菌素分离? 有一部实体不易找到，也没有菌核， 可以用菌素进行分离。如蜜环菌、假蜜环 菌。其操作方法是先用酒精或升汞将菌素 表面黑色皮层轻轻擦拭2～3次， 然后去掉 黑色外皮层（菌鞘），抽出白色菌髓部分； 用无菌剪刀将菌髓剪一小段，接种在培养 基上，保温培养，即得该菌菌种。 ? 菌素分离要注意：因菌素比较细小，分离 素也比较细小，分离时极易污染杂菌，所 以要严格操作。 3．基内菌丝分离培养法? 利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯 菌种的一种方法，叫基内菌丝分离法。 此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现， 而且是朝生暮死，不易采得的子实体。基内分离 法与组织分离法不同之点是，干燥的菇木或耳木 中的菌丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢 复生长。因此，有必要保留较长的时间（约1个 月），以断定菌丝是否能成活。基内菌丝分离法 又可分为，材中菌丝分离（即菇木或耳木分离法） 及土中菌丝分离法等。 （1）材中菌丝分离法? 就是菇木或耳木分离法，为了减少杂菌的感染，菇（耳） 木在分离之前，必须进行无菌处理。可以把菇（耳）水表 面用酒精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌的孢子，或再用 0.1％的升汞水浸孢几分钟，然后用无菌水冲洗后用无菌 滤纸吸干。接种块切取时应注意。接种块必须在该菌菌丝 分布的范围内切取。所以，菌丝生长缓慢的种类应浅取； 菌种生长快的种类可以深取。同时。还应根据菇菌的种类、 木材质地、菇（耳）木粗细、发育时间的长短来确定菌丝 分布的范围。然后用一把利刀进行切取。接种块应尽量小 些，以减少杂菌感染机会，提离菌种的纯度。接种块移到 培养基上，就应该放到适合菌丝生长的22℃～26℃ 的温 室或温箱中培养，使菌丝恢复生长。 （2）土中菌丝分离? 食用菌种类很多，许多土生的食用菌；孢子不易萌发。组 织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫 土中菌丝分离。 ? 土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多 种多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微 生物的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的 菌丝接种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些 细菌 生长的药物，如 40微克／升的链霉素或金霉素。如 发现感染细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木 屑培养基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑 培养基中不易扩展；只局限于接种处。待菌丝长出感染区 后，就可以再进行扩大提纯了。 （3）子实体基部分离例：袋栽银耳? 从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分 离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离，从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中；选择生活力最强的幼耳5袋，移 到气候温和，有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力。经培 养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回，作为分离的母体。再从中 筛选最理想的一朵，用利刀割掉银耳子实体，放置于 0℃的冰箱或有敌敌畏的容 器中过夜，以便瓶中的害虫。然后用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边 的杂质，连同接种工具、接种培养基等移进无菌室。经灭菌后，用接种刀把袋口 上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用接种 针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母种试管培养基的中央，轻轻地脱 去接种针， 塞上棉塞。 为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支 试管，以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由 于培养基内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。经2-3天后，分离物的边缘 就可看 到白色菌丝。每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与耳木 分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块扭结团出现红、水珠时，即 可扩大原种。 （二）原种和栽培种的接种培养? 母种获得以后，为了满足菌种生产的需要。应选出优良、纯度高的母种进 一步扩大为原种。 ? 原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基。 ? 瓶装或袋装的原种培养基灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内，待瓶中的培 养基冷至30℃以下，可按照无菌操作程序进行接种。 ? 菌种瓶（袋）放入培养室时，要经常进行检查，一经发现杂菌污染，立即 取出。培养成的原种，菌丝体必须健壮有力，紧贴瓶壁而不干缩，颜色纯 正，具有一定清香味，生活力强，扩制成栽培种时吃料快。 ? 栽培种就是将原种进一步扩大培养成种，它和原种的接种及培养相同。 一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作培 养基。蘑菇多用粪草做培养料。 ? 栽培种要求料块不脱水干缩。菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味，无 老化现象，无杂菌污染，有的种许可有少量原基，接入栽培料后，发菌快， 长势好，生活力强。 ? 原种在接栽培种时，原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用。 （三）液体种的简单培养? 目前，用液体深层发酵法生产菌种，具有生产量大、周期短、菌龄整 齐、成本低廉、接种方便等特点，是实现食用菌工厂化生产的目标。 现将液体种培育过程简述于后，供参考。 简言之就是将纯正优良的菌种，接入液体培养基（固体培养基不加 凝固剂），使菌丝繁殖形成大量小菌球，然后将这种培养基拌入木屑 或棉籽皮料内，制成菌块、培养其形成子实体。还可用于制原种、栽 培种。 培养液体菌种，可将培养液装入三角瓶中，约占空瓶的五分之一重 量。用摇瓶机（也称摇床）来培养。摇瓶机有旋转式和往复式两种， 一般多用往复式。液体培养基可用马铃薯汁（加糖），麦芽汁配制， 也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机盐等配制。可以混合培养基，因适 用于多种食用菌和药用菌的培养，均有好效果。组分：豆饼粉2％， 玉米粉1％， 葡萄糖3％，酵母粉0.5％，磷酸二氢钾0.1％，碳酸钙 0.2％， pH自然， 12℃灭菌半小时。然后接种培养。 如果生产量较大，在三角瓶的基础上，再逐级扩大种子缸，发酵罐 中进行液体深层通气发酵，产生大量菌种。但由于生产中要求设备繁 多，技术性强，我们还应创造条件；实现食用菌栽培的现代化。 （四）菌种质量的鉴定? 菌种质量鉴定最好的方法是，做出菇试验。 但是时间比较长。在购置菌种时，或在菌 种生产中，如何能知菌丝生长情况，快速 判断菌种质量？我们介绍几种方法 1.观察? 优良菌种菌丝浓白，绒状，粗壮密集，生 长整齐，速度快，香味浓厚。 2.优良菌种标准? 可归纳为：纯、香、正、壮、润五个字。 检查时，打开瓶塞，从菌种瓶中部取出小 块菌丝体，观察色泽，闻其气味，手捏料 块检查其含水量，看是否符合上述要求标 准。 3.显微镜检查? 挑取少量菌丝，置显微镜上观察其形态， 菌丝分枝，分隔情况，锁状联合，细胞膜 的厚薄。 培养观察：从菌种瓶中挑取小块 菌丝体，接种斜面试管培养基上。 置23℃～25℃恒温中培养，经五周后检查 菌种生活力。如果菌丝生长快，旺盛纯一， 健壮浓厚，长且整齐，则表示菌种的生活 力强。 4.分块法? 在桌上放一张白纸，把菌龄相同的菌种从 瓶内取出一大块，用手分成2块，再把2块 分成4块，4块 分成8块，依次进行。优良菌 种整块多，碎渣少。劣次菌整块少，碎渣 多。 5.液体菌种鉴别? 当三角瓶或发酵缸培养3-7天后，如液面出 现气泡，产生油皮、混浊等现象，说明菌 种本 身带有杂菌。如菌块上浮，或迟迟长 出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱。 白块四周的菌丝生长快、浓白、棉絮状， 表明菌种生命力强。 （五）菌种生产过程中的杂茵防治? 在生产菌种时，要时刻注意杂菌污染，以防为主，一旦 发生，根治很不容易。所以整个制种过程都必须在无菌条 件下进行。接种箱及所有分离、接种的用具、器皿，都要 进行严格的消毒灭菌。工作人员的双手要用消毒剂清洗， 并穿戴消过毒的工作服、帽和口罩，动作要敏捷、准确， 尽量不要讲话，以防空气中的杂菌感染。 ? 分离母种时，选择出菇早、生活力强，第一潮菇是关键， 因它生活力强，接种后迅速占领阵地，无杂菌侵入的机会。 被污染的菌种，原因是多方面的，一般是灭菌不彻底所致， 或因接种时无菌操作不严、瓶盖不合适造成的。所以灭菌 一定要彻底，最好在接种萌将培养基置25℃左右温箱中做 效果检查，经2天不长杂菌，说明彻底，可以使用，接种 过程中一定要严格无菌操作。 ? 污染杂菌另一个原因可能是分离母种时感染杂菌，因种菇 表面带菌，消毒不彻底，通过组织块将杂菌带入培养基 ? 总之，污染机会很多，要注意消毒，按无菌操作规程 彻底灭菌，层层把关，环环抓紧，严加注意；提离菌种质 量

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