CRISPR-Cas9系统已经广泛应用于基因组编辑。但是该系统在进行基因组编辑时,除需要识别靶序列之外,还需要识别一段NGG的邻近核苷酸序列,这大大了该系统的编辑位点选择范围。在前期的研究中,课题组通过对Cas9蛋白进行定点突变,获得了Cas9蛋白的VQR变体,并在水稻基因组中成功实现对NGA邻近序列的编辑,极大的扩展了基因编辑位点的选择范围(Hu et al., 2016. molecular Plant),然而CRISPR-Cas9-VQR系统与原CRISPR-Cas9系统相比较,其编辑效率依然偏低,这了该系统在水稻中的推广应用,为此,本研究通过优化sgRNA的结构以及使用水稻内源性强启动子来驱动VQR变体的表达,成功将CRISPR-Cas9-VQR系统的编辑效率提高到了原有系统的3到7倍。(生物谷 推荐:
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